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    伯豪生物
    甲基化捕獲測序(MC-seq)

    技術簡介

    SureSelectXT 甲基化靶向序列捕獲平臺(Methyl-Seq) 是安捷倫公司推出的甲基化發現系統。該平臺為甲基化基因組區域研究提供了具有單堿基分辨率的高度可靠的方法?,F有目錄化產品包括人、小鼠和大鼠甲基化測序設計。該產品相比常見的甲基化檢測平臺具有獨到的優勢。

    通過檢測單獨的 CpG 可獨具特色地提供比甲基化芯片更多的信息,相比全基因組重亞硫酸鹽測序,可提高通量并降低成本??砂l現限制性內切酶及免疫沉淀所不能檢測的甲基化區域。

    技術原理

    甲基化捕獲測序技術原理

    應用領域

    廣泛應用于大小鼠的藥物模型,干細胞研究、腫瘤和其他復雜疾病研究,特別適用于大小鼠物種的全表觀基因組的標志物發現和機制探尋。

    伯豪優勢

    作為 Agilent 公司的認證服務商,伯豪采用穩定的 SureSelect 捕獲系統進行甲基化捕獲;

    具有豐富的表觀功能機制和生物標志物篩選研究經驗,幫助客戶發表多篇高分文章;

    專業報告解讀系統,對科研應用支持良好。

    樣本要求

    樣品類型:人、小鼠和大鼠;

    樣品純度:OD 260/280 值應在 1.8~2.0 之間;RNA 應去除干凈;

    樣品濃度:使用 Qubit 準確定量 DNA 濃度;

    樣品總量:每個樣品 DNA 起始總量不少于 1ug。

    分析流程

    甲基化捕獲測序數據分析例圖 1

    甲基化捕獲測序數據分析例圖 2

    案例展示

    案例:《Nature》主刊報道胚胎模型的甲基化研究

    研究背景

    2i 是 Mek1/2 和 Gsk3β 的抑制劑,L 是白血病抑制因子,S/L 是血清和白血病抑制因子,2i/L 的短期處理可以將小鼠胚胎干細胞(ES)誘導為與著床前胚胎內細胞團(ICM)相似的狀態。同時延長 2i/L 處理時間,可導致小鼠 ES 細胞中一系列不可逆的表觀遺傳和基因組變化,并損害其發育潛力,而這一影響是由長時間抑制 Mek1/2 引發的。

    研究思路

    《Nature》主刊報道胚胎模型的甲基化研究

    研究成果

    結果表明,2i/L ES 細胞的衍生可導致 DNA 甲基化的廣泛降低,包括配子來源的甲基化。這些胚胎干細胞在胚胎和胎盤發育過程中表現出損傷,說明了 2i/ L 建立的胚胎干細胞在多能干細胞質量方面的局限性。作者的發現對于理解人類幼稚型多能干細胞在治療應用和疾病建模方面的具有重要意義,因為在這些細胞中往往丟失印記和卵母細胞來源的甲基化記憶。作者還發現,早期傳代的雌性 a2i/L ES 細胞和 t2i/L ES 細胞保留了配子來源的 DNA 甲基化和自主發育潛能。作者認為這些胚胎干細胞可以作為另一種細胞培養平臺,用于早期胚胎發生的生物學研究。

    參考文獻

    Yagi M, Kishigami S, Tanaka A, et al. Derivation of ground-state female ES cells maintaining gamete-derived DNA methylation[J].Nature, 2017, 548(7666): 224.

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